دانلود فایل های علمی و دانشگاهی

PAGE در سيستم بافري ناپيوسته :

PAGE در اغلب موارد در سيستم بافري ناپيوسته (چندقسمتي ) انجام مي گيرد. در سيستم بافري ناپيوسته، ‌بر خلاف سيستم بافري پيوسته ، تركيب يوني و pH بافر در نمونه ، ژل و مخازن با يكديگر تفاوت دارد. در اين سيستم ژل شامل دو قسمت ژل فوقاني و ژل تحتاني است. اين دو قسمت علاوه بر بافر ، از نظر اندازه منافذ ژل نيز متفاوت هستند.

مزيت سيستم بافري ناپيوسته در اين است كه كارايي الكتروفورز آنچنان متأثر از حجم نمونه نيست. در اين سيستم ميتوان حجم هاي بالايي از نمونه هاي رقيق پروتئين را بطور مطلوب به اجزاي آن تفكيك نمود. دليل آن اين است كه پروتئينها در طي حركت در ژل فوقاني (ژل متراكم كننده ) به صورت لايه هاي بسيار نازكي درمي آيند و سپس در ژل تحتاني (ژل جداكننده) به اجزائ خود تفكيك ميشوند.

اين سيستم به سه نوع مختلف ، با pH بالا ، pH پائين و pH خنثي انجام ميشود. سيستم بافري ناپيوسته با pH بالا (سيستم تريس – گلايسين ) متداول ترين سيستم بافري براي الكتروفورز پروتئينها در شرايط طبيعي است كه اولين بار توسط داويس ارائه گرديد. در اين شرايط ، با توجه به اينكه نقطه ايزوالكتريكي (pI) اغلب پروتئينها در دامنه 7-4 قرار دارد، اين مواد داراي بار منفي (به ميزان متفاوت ) شده و به سمت قطب مثبت (در جهت بالا به پائين ) حركت مي كنند.